Plate-forme de Recombinaison Homologue
Responsable : Ghislaine HAMARD
Présentation du service
La plate-forme de recombinaison homologue a été créée en février 1998 au sein de l’Institut Cochin. Elle a pour but la production de lignées de souris knock-out, knock-in...avec l'approche de votre choix.
Ce service est ouvert aux équipes de l’Institut Cochin ainsi qu’à des collaborations externes à l’Institut Cochin (laboratoires de recherche publics et privés). La plate-forme a comme mission : le conseil, la production et la formation.
Les locaux sont constitués de deux laboratoires : l’un uniquement dédié à la culture de cellules ES (équipé de trois hottes de culture) ; l’autre est doté de deux stations de micro injection Leica/Eppendorf équipées de lazer Hamilton. La partie animalerie est implantée au sein du CCGF (Centre Cochin de Génomique Fonctionnelle) de l'Institut Cochin.
Localisation
La plate-forme est au 4e étage, pièce 4013-4014 et 4021 du CHU Cochin Port-Royal, 24, rue du faubourg St Jacques 75014 Paris. (plan d’accès)
Organisation
Responsable scientifique et technique :
Ghislaine HAMARD
Collaborateurs :
- Christophe HOUBRON (titulaire)
- Marcio Do Cruzeiro (titulaire)
- 2 CDD et stagiaires des écoles ou de divers laboratoires
Contact
Ghislaine HAMARD
Tél : 01-44-41-24-74 (répondeur)
Fax : 01-44-41-24-21
hamard@cochin.inserm.fr
Fonctionnement
La plate-forme peut interagir, avec les équipes désireuses de mener à bien un projet d’invalidation, à différents niveaux.
En amont de l’électroporation, dès le concept de la construction.
La plate-forme, de par ses multiples collaborations en recombinaison
homologue, est à même de conseiller sur la conception du transgène, et ceci
afin de travailler dans des conditions les plus favorables, toujours avec
l'objectif d'augmenter l’événement de recombinaison homologue.
Afin de faciliter le travail de l’équipe en charge du projet, la plate-forme met à disposition un certain nombre de matériels biologiques et techniques :
- banque d’ADN génomique
- différentes cassettes de sélections
- cellules ES et ADN pour tests Southern et PCR
- ADN de souris pour tests Southern et PCR
- Protocoles, produits et matériels pour la purification du transgène à électroporer
L'électroporation du transgène.
Suite à l’électroporation, les clones de cellules ES résistants à la
sélection sont amplifiés individuellement et congelés. Une partie de
ces clones est dérivée et remise à l’équipe responsable du projet
pour le génotypage par Southern et PCR.
Micro injection des cellules ES génétiquement modifiées dans les
blastocystes
Avant l’injection des cellules ES dans les blastocystes, plusieurs
vérifications sont nécessaires, aussi bien au niveau de la plate-forme qu’au
niveau du demandeur (caryotype fait par la plate-forme, génotypage des clones
décongelés, séquençage des régions Lox, FRT, jonctionnelles…)
Après la micro injection et la naissance des chimères, nous
procédons aux croisements des souris chimères et assurons le passage à la
lignée germinale (F1).
Conditions
Pour accéder aux services de la plate-forme de recombinaison homologue, il est nécessaire de nous contacter afin d’obtenir le dossier scientifique et administratif à compléter, ainsi que les conditions financières (voir tarifs).
Les expériences ne pourront être engagées que lorsque la totalité des informations demandées nous seront fournies.
