Plate-forme de Cytométrie en flux

Responsables : Brigitte CHANAUD - Laurence STOUVENEL

Présentation de la plate-forme 

La plate-forme de cytométrie en flux a été créée le 1^er janvier 1995. Elle a une double vocation de service et de formation. Elle est ouverte aux différents membres de l'Institut Cochin et de l'IFR Alfred Jost, mais également aux équipes extérieures.

Les analyses ou tris de cellules sont effectués sous forme de "prestations de service", à la demande des équipes de recherche. Un entretien préalable nous permet d'arrêter le protocole de préparation des cellules et de planifier la manipulation ( voir préparation des cellules ).

Présentation de la technologie

Le but de la cytométrie en flux est d’analyser les paramètres optiques résultants de l’interaction d’une lumière avec des cellules en suspension, ces cellules étant analysées une à une.

Cette technique se rapproche donc de la microscopie : observation de la forme et de la fluorescence (après addition de sondes fluorescentes) par l’utilisation d’une source de lumière monochromatique.

Avantages :

• Etude cellule par cellule, permettant la détection de cellules rares ainsi que la distinction des différentes sous-populations.

• Analyse rapide d’un grand nombre de cellules (plusieurs centaines de cellules par seconde), permettant une meilleure approche statistique.

• Grande sensibilité : l’analyse globale de la cellule et l’utilisation de détecteurs très sensibles permettent d’observer de très faibles intensités de fluorescence et de quantifier cette fluorescence.

• Enfin, sur les appareils les plus performants, la cytométrie permet d’ajouter à ces fonctions d’analyse, une fonction de tri, permettant de séparer les cellules selon un critère défini par une combinaison des paramètres d’analyse.

 Inconvénients :

• Analyse globale de la cellule : on ne peut pas localiser les marqueurs fluorescents dans les compartiments cellulaires.

• Mise en suspension obligatoire des échantillons cellulaires : parfois dissociation nécessaire (cellules adhérentes) pouvant augmenter la mortalité cellulaire par fragilisation de la membrane plasmique,ou risque d’altération de certains antigènes de surface.

Prestations fournies par la plate-forme 

     Une formation théorique (principes et potentialités de la cytométrie) et pratique à l'utilisation des cytomètres analyseurs. L'objectif de cette formation est que tous les utilisateurs deviennent rapidement autonomes et indépendants quant à l'utilisation des analyseurs. Cette formation peut-être accompagnée, pour ceux qui le souhaitent, d'un encadrement personnalisé qui comprend : 

• une aide à la conception des expériences (en particulier sur le choix des fluorochromes et des techniques de marquage cellulaire)

• une aide à l'analyse, à l'interprétation et à la présentation des résultats.

    Une adaptation de l'appareillage aux utilisations émergentes en développant de nouvelles mises aux points techniques.

    Une maintenance technique des appareils.

Personnels

Responsable scientifique : Bruno LUCAS, DR2

Responsables de la plate-forme : Brigitte CHANAUD, IE1 et Laurence STOUVENEL, IE2

Membre de l'équipe : Martine DE SOUSA, TR

Localisation

Institut Cochin - Bâtiment Gustave Roussy

22 rue Méchain

75014    Paris

3^ème étage, pièces 314 (cytomètres et trieur) et 316 (bureau)

Tél : 01 40 51 65 67

u1016-cytometrie@inserm.fr

Réservation

La réservation se fait par téléphone ou par mail

- 15 jours à l'avance pour le tri cellulaire

- quelques jours à l'avance pour l'analyse cellulaire.

Tarifs 2008